快速检测洋葱伯克霍尔德菌巢式荧光定量PCR法建立

摘要：

目的 建立能直接快速应用于临床检测洋葱伯克霍尔德菌的巢式荧光定量PCR法.方法 根据洋葱伯克霍尔德菌recA基因序列设计用于普通PCR扩增的外引物,同时设计用于荧光定量PCR的内引物.分别以洋葱伯克霍尔德菌等细菌的标准株为模板,以外引物进行第一轮PCR扩增;所得PCR产物为模板,以内引物进行染料法荧光定量PCR检测recA基因表达水平,评估巢式荧光定量PCR法的特异性.同时将洋葱伯克霍尔德菌的菌液和基因组DNA进行浓度梯度稀释,继续进行巢式荧光定量PCR,确定此方法的灵敏度.最后用巢式荧光定量PCR法和Vitek 2 Compact仪器分别鉴定35例临床标本,比较两者的检出能力.结果 巢式荧光定量PCR法只针对洋葱伯克霍尔德菌有扩增曲线,而对其他菌株无检测信号.同时,巢式荧光定量PCR法的检测下限是1×101 CFU/mL的菌液和1×10-5 ng/μL的基因组DNA,具有较高的灵敏度.巢式荧光定量PCR法能有效检测出14例临床标本存在洋葱伯克霍尔德菌感染(检出率为40.0％),而Vitek2 Compact仪器仅检测出10例(检出率为28.6％),其中4例无法识别.结论 巢式荧光定量PCR法具有有效、快速和直接应用于临床检测的优点,并且特异、灵敏和准确等特点,值得在临床推广.

关键词：洋葱伯克霍尔德菌、recA基因、巢式荧光定量PCR、临床检测

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资助基金：广州市医药卫生科技项目20161A010082

在线出版日期：2020-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：437-440,458