Taq DNA聚合酶5'～3'外切活性对荧光定量PCR的影响

摘要：

目的 为探讨Taq DNA聚合酶(后简称Taq酶)中5'～3'外切酶活性在Taqman探针法荧光定量PCR中的作用及影响,指导热启动Taq酶性能改造,本文研究了不同热启动Taq聚合酶的5'～3'DNA外切酶活性差异,以及该活性的高低对Taqman探针法荧光定量PCR的影响.方法 使用荧光探针为底物,分别测定不同热启动Taq酶的聚合酶活性及外切酶活性,对比在相同聚合酶活性下外切酶活性的差异,以及在荧光定量PCR扩增反应中的差异.结果 在聚合酶活性相等的条件下,不同的热启动Taq聚合酶具有不同的5'～3'DNA外切酶活性,经化学修饰的Taq酶的5'～3'DNA外切酶活性分别下降2.7倍和4.55倍,经抗体修饰的Taq酶5'～3'DNA外切酶活性没有变化.在乙型肝炎病毒(HBV)DNA荧光定量PCR检测体系中,加入同等聚合酶活性单位的不同修饰方法制备热启动Taq酶,外切酶活性高的酶比活性低的酶ct值更低.结论 在Taqman探针法荧光定量PCR反应中,Taq酶对探针的外切降解过程是反应的限速步骤,提高Taq酶5'～3'DNA外切酶活性有利于提高反应效率.

关键词：定量PCR、Taq DNA聚合酶、DNA外切酶

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资助基金：国家科技重大专项2018ZX10732401,2018ZX10306414

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：170-174,243