一种基于液相基因芯片技术对甲型和乙型流感病毒分型检测方法的建立

摘要：

目的 建立能够对甲型流感病毒(influenza virus A,INFA)和乙型流感病毒(influenza virus B,INFB)进行区分的液相基因芯片技术,为甲型和乙型流感病毒的分型提供一种高通量、高灵敏度的检测和鉴定方法. 方法 从NCBI的GenBank下载具有代表性的流感病毒基因组序列,利用生物信息学软件BioEdit进行序列比对,分别设计针对INFA和INFB的简并引物和特异性探针,将设计好的引物和探针与GenBank中所有的基因序列进行比对,以验证其特异性.经探针合成、悬浮液相芯片制备和检测条件的优化获得用于甲型和乙型流感病毒分型的液相基因芯片. 结果 所检测INFA和INFB均可获得特异性杂交信号,非特异性杂交信号不明显,将2种病毒混合,模拟混合病毒感染也可以得到相应的特异性杂交信号.灵敏度评估结果表明INFA的检测灵敏度为1～10空斑形成单位(plaque forming unit,pfu),而INFB为10～100 pfu.将本方法用于检测11份临床样本,其结果与荧光定量分型逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法的结果一致. 结论 本研究初步建立了INFA和INFB的液相基因芯片检测技术,可用于流感病毒的初步筛查和鉴定,并且可以进行混合感染样本的检测,为流感病毒的分型和鉴定提供了一种新的手段.

关键词：甲型流感病毒、乙型流感病毒、液相基因芯片、病毒分型检测

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分类号：R37;R44

资助基金：国家自然科学基金课题31460017,81672072;海南省重点研发计划项目ZDYF2017091;海南省自然科学基金项目20158287;海南省高等学校科学研究项目Hnkyzx2014-08,Hnky2017ZD-16

在线出版日期：2017-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：313-318