基因组DNA甲基化的高效毛细管电泳定量检测

摘要：

目的：建立快速准确的高效毛细管电泳（ HPCE ）定量基因组 DNA 甲基化的方法。方法以含有十二烷基磺酸钠（SDS）的碳酸氢钠溶液作为背景电解质溶液，优化运行电压、柱温，对DNA组成单元脱氧核苷酸进行分离定量。结果5种脱氧核糖核苷和5种核糖核苷在10 min 内实现基线分离。脱氧胞苷（dC）的标准曲线为Y ＝172540.15X-6.19，相关系数（R）为0.999，线性范围从2×10-3 mol／L 到2×10-1 mol／L。5-甲基脱氧胞苷（5 mdC）的标准曲线为 Y ＝170271.74X-46.19，相关系数（R）为0.995，线性范围从1×10-4 mol／L 到2×10-2 mol／L。日内相对标准偏差（RSD％）<5％，日间相对标准偏差（ RSD％）<9％。5 mdC 和 dC 的检测限均为1×10-5 mol／L。样品的甲基化程度以（5 mdC ）含量占总脱氧胞苷（5 mdC ＋ dC ）的比率表示。应用本方法分析小牛胸腺 DNA 的甲基化水平，结果为6.18％，与本研究组所得液质联用（LC-MS／MS）的定量结果（6.77％）和文献报导中应用液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）的检测结果（6.26％）对比，一致性好。结论本研究建立的方法分析速度快，准确性高，稳定性好，灵敏度满足微量样本的检测需求，可以用于临床甲基化诊断。

关键词：DNA甲基化、高效毛细管电泳、定量分析

分类号：R99;TP3

资助基金：国家自然科学基金青年基金NSFC20905051；北京市科技新星计划B类2009B36

在线出版日期：2014-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：388-393