PPAR γ基因RNA干扰质粒的构建与鉴定

摘要：

目的 构建表达细胞转录因子PPARγ的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究PPARγ参与的细胞信号通路以及PPARγ为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNA干扰质粒.方法 选取PPAR γ基因的19nt特异性序列,设计针对PPARγ的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中,用EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下将包含PPARγ基因的RNAi重组载体转染前列腺癌细胞PC-3.转染48 h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析对照组与转染组PPARγ蛋白的表达水平.结果 双酶切证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确；含PPARγ基因的RNAi载体转染前列腺癌细胞PC-3细胞成功；Westernblotting结果显示,与空质粒对照组相比,转染组细胞PPARγ表达下调.结论 成功构建含人PPARγ基因的RNAi载体,为研究PPARγ参与的细胞信号通路提供了稳定转染的RNA干扰质粒.同时,阻断PPAR γ的信号通路将为基因治疗提供一个较好的靶点,研究结果为以PPARγ为靶点的基因治疗提供了有利工具.

关键词：载体、PPARγ、RNAi

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分类号：R93;R73

资助基金：国家自然科学基金31101003;广东省医学科学技术研究基金B2011134;广州医学院博士基金项目2010C01

在线出版日期：2012-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：163-166