葡萄糖异构酶基因的筛选、表达及酶学性质研究

摘要：

通过基因挖掘的方法从NCBI数据库中筛选得到一株嗜热的葡萄糖异构酶(GI)产生菌株Thermotoga petrophila RKU-1,化学合成该酶的基因并在大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中进行可溶性表达.重组葡萄糖异构酶经过Ni-NTA柱亲和层析分离纯化后,对纯酶进行SDS-PAGE检测,结果显示为单一条带,其分子量大小为50.8 kDa.测定了该重组酶对底物D-葡萄糖的活力为19.8 U/mg,并对其酶学性质进行了表征.该酶最适温度和pH分别为85 ℃和7.0,Co2+对催化活力起着非常重要的作用,对底物D-葡萄糖的Km值和Vmax值分别为373 mmol/L和13.4 U/mg.在最适条件下,反应在4h内达到平衡,果糖得率最高达到53.8％.

关键词：基因挖掘、葡萄糖异构酶、表达、酶学性质

所属期刊栏目：44

分类号：Q814(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金31401527;浙江省重大科技攻关项目2013C02027

在线出版日期：2016-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：19-23