不同水解方法对DNA加合物分析鉴定的影响及应用研究

摘要：

DNA加合物的分析鉴定是研究DNA损伤的重要技术手段.采用不同的DNA水解方法可获得不同的碱基、核苷和核酸片段等产物,这些方法各具优势,可用于不同的分析目的.本研究以经典的烷基化试剂芥子气为模型化合物,进行溶液孵育与动物染毒实验.采用3种常用的水解方式(加热水解、酸水解和酶解)处理目标分析物,利用质谱技术对产物进行筛查与定量分析,系统地比较了这3种常用的水解方法对不同分析样本和具有不同加合形式的加合物的水解效率的影响.结果表明,不同修饰位点的DNA加合物的稳定性存在差异,鸟嘌呤与腺嘌呤的N位点加合物的结构较稳定,鸟嘌呤的O6位点加合物则对酸和热不稳定.在3种水解方式中,加热水解法的水解效率较低;酸水解法高效稳定,其产率较加热水解法提高了10.4％ ～94.9％,产物中碱基形式占比>99％,适用于已知结构的DNA加合物的高通量、高灵敏质谱分析;酶解法可产生碱基与核苷等多种产物,产物信息丰富,适用于新结构以及未知结构加合物的筛查与鉴定,但因其酶解效率受DNA加合位点、基质效应与酶解条件等因素限制,定量分析加合物时其准确性受到影响.

关键词：DNA水解、DNA加合物、液相色谱-质谱联用技术

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分类号：O657.63;TS207.53;R285.5

资助基金：国家自然科学基金No.22104153

在线出版日期：2022-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1048-1056,中插9