pH值敏感相分离特性的蛋白质酶解试剂研究

摘要：

通过DEC/NHS偶联反应将胰蛋白酶(Trypsin)连接到具有pH值敏感性的壳聚糖(CS)链上.Trypsin-CS偶联物保留了CS的pH值敏感相分离特性及Trypsjn的酶催化活性.浊度滴定实验表明,此偶联物的临界相分离pH值(CPSP)仍保持在偏中性范围内,并且随CS的分子量降低而略有上升.这种偏中性的CPSP值有利于相分离循环过程中保持酶的催化活性.分子量为8×104的CS与Trypsin的偶联物在存放30 d后可保留69%的初始酶活性.偶联物经过6次循环使用后的残余活性为初始活性的79%.Trypsin-cs偶联物可在低于CPSP值的条件下对蛋白质进行均相酶解,并在高于CPSP值时从催化体系中分离出来.HPLC肽谱分析表明,Trypsin-CS偶联物中Trypsin的自降解被显著抑制,因而有效消除了Trypsin自降解肽段对肽谱分析的干扰.

关键词：pH值敏感高分子、胰蛋白酶、偶联、酶活性、肽谱分析

所属期刊栏目：39

分类号：O65;TD8

资助基金：国家转基因重大专项2009ZX08011-014B

在线出版日期：2011-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：12-16