唑来膦酸对钛微粒诱导的破骨细胞前体细胞RAW 264.7分化的影响

摘要：

目的：观察唑来膦酸对钛微粒诱导的破骨细胞前体细胞RAW 264.7分化的影响，探讨其防治假体周围骨质疏松的可能性。方法：体外培养单核巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7。制备钛微粒， MTT法检测绘制RAW 264.7细胞增殖曲线，寻找唑来膦酸最佳干预浓度。将RAW 264.7分为3组：Ti微粒组（0.1%体积比钛微粒+含质量分数为10%的胎牛血清培养基）、Ti+唑来膦酸组（0.1%体积比钛微粒+含质量分数为10%的胎牛血清培养基+最佳浓度唑来膦酸）和对照组（含质量分数为10%的胎牛血清的常规培养基）。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色法观察细胞的形态。采用ELISA法检测培养液中细胞核因子κB活化因子受体（receptor activator of NF-κB,RANK）的浓度，生化法测定细胞上清液中TRAP活力，用qPCR法检测TRAP、基质外金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、碳酸酐酶Ⅱ（carbonic anhydraseⅡ,CAⅡ）、磷酸酶-活化T细胞核因子（NFATcl） mRNA的表达；Western Blot法检测TRAP、RANK、CtsK蛋白的表达。结果：钛微粒能刺激RAW 264.7分泌促破骨细胞分化的因子，并能促进单核细胞向破骨细胞转化。唑来膦酸可明显下调钛微粒诱导的RAW 264.7RANK的表达，以及TRAP、MMP-9、CAⅡ、NFATclmRNA和蛋白的表达，差异有统计学意义（P <0.05）。结论：唑来膦酸能有效抑制破骨细胞前体细胞RAW 264.7分化，减少破骨细胞的形成，下调RANK、TRAP等破骨细胞特异细胞表型和功能基因mRNA的转录水平，有望成为防治人工关节置换术后假体周围骨质疏松的药物。

关键词：唑来膦酸、钛微粒、RAW 264.7、共培养分化

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分类号：R68;R31

资助基金：国家自然科学基金81302986；福州市卫生系统科技项目资助2013-S-wq8，2013-S-wt3

在线出版日期：2016-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：5-9,18