牛樟芝鲨烯合酶基因的克隆与表达分析

摘要：

为了解牛樟芝三萜类生物合成、调控机理,以多孔菌科真菌茯苓(Wolfiporia cocos,AFR13032.1)的SQS基因为模板对牛樟芝基因组数据进行本地Blast,分离获得牛樟芝鲨烯合酶(AcSQS 基因.以该序列为模板设计特异引物AcSQSF0和AcSQSR0,通过PCR扩增得到AcSQS eDNA全长,并对其进行生物信息学分析,检测不同碳氮源添加物的培养基上该基因的表达水平.结果显示:克隆得到的基因为牛樟芝鲨烯合酶(AcSQS),该基因含4个外显子,3个内含子,外显子拼接总长1 803 bp,编码600个氨基酸;其蛋白序列的1 ～17位为信号肽位点,具两段跨膜结构,可能定位于内质网;位于该蛋白189～ 204位的CHYVAGLVGEGLTRL和225 ～238位的MGLMLQKTNIIRDY的保守基序为鲨烯合酶识别位点,DTIEDD和D (Y/F) RED为FPP绑定位点;蛋白网络分析显示其位于三萜类化合物的代谢网络中;聚类分析显示AcSQS蛋白和茯苓、硫磺多孔菌、拟蜡菌、灵芝、云芝等的SQS蛋白聚为一支;不同碳氮源添加物培养基上的表达分析显示:果糖诱导该基因表达的能力最强,而不同氮源添加物诱导该基因表达的能力无明显差异.

关键词：牛樟芝、鲨烯合酶、基因克隆、表达分析

所属期刊栏目：33

分类号：Q939.92(微生物学)

资助基金：对外科技合作计划项目2015IA004;国家自然科学基金青年项目31400488;云南省应用基础研究计划面上项目2016FB055

在线出版日期：2017-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：50-59