均匀设计优化黑木相思ISSR-PCR体系

摘要：

采用均匀设计,对影响黑木相思ISSR-PCR体系的引物、Mg2+、dNTP、Taq DNA聚合酶和模板DNA浓度等进行5因素5水平和5因素3水平两轮优化,建立了适合于黑木相思ISSR-PCR的体系:在20 μL反应体系中,含引物0.30 μmol·L-1,Mg2+ 3.00 mmol·L-1,dNTP 0.15 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶0.75 U,模板DNA 2.00 ng·μL-1.在此基础上对扩增程序中的循环次数、退火温度、退火时间进行筛选,获得的扩增程序为:94 ℃预变性5 min;接着进行33个循环:94 ℃变性35 s,52～61.5 ℃退火52 s,72 ℃延伸90 s;循环结束后,72 ℃延伸10 min.同时筛选得到10个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.

关键词：黑木相思、均匀设计、ISSR-PCR

所属期刊栏目：24

分类号：Q949.662(植物学)

资助基金：福建省自然科学基金资助项目 B0410007

在线出版日期：2009-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：78-83