Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

摘要：

背景与目的:Ⅰ型磷酸酶抑制亚基-1(inhibitor-1 of protein phosphatase Ⅰ,PPI1)依赖于35位苏氨酸的磷酸化而发挥抑制作用.本研究目的在于观察PPI1野生型和持续活化型突变体的表达对宫颈癌细胞株的凋亡及凋亡刺激敏感性的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:通过Lipofectamine介导.用PPI1野生型和持续活化型突变体表达质粒分别转染HeLa细胞,以未转染的及转染空载体的HeLa细胞为对照组,用RT-PCR和Western blot鉴定目的蛋白的表达:通过克隆形成实验观察PPI1对细胞克隆形成能力的影响,用Hoechst33258荧光染色、亚二倍体分析法分析PPI1对HeLa细胞凋亡的影响,用流式细胞术分析转染PPI1后的HeLa细胞对肿瘤坏死因子(tumor-necrosis factor,TNF)凋亡刺激的敏感性,用Western blot分析PPI1对凋亡相关蛋白表达及MAPK信号转导通路的影响.结果:PPI1野生型和持续活化型突变体在HeLa细胞中能够有效表达.荧光染色和亚二倍体分析均表明PPI1持续活化型突变体的表达使细胞凋亡增多,并能明显抑制HeLa细胞的克隆形成能力.Western blot分析表明,PPI1持续活化型突变体可使促凋亡分子P53、P27、BAK表达上调,而抗凋亡分子Bcl-2和Bcl-xL的表达下调.流式细胞术分析表明PPIl持续活化型突变体表达的HeLa细胞在TNF-α刺激后细胞凋亡率为19.06%,而对照组为2.67%和1.89%.Western blot分析表明,TNF刺激后,在JNK信号转导通路中,该组细胞JNK的磷酸化程度比对照组明显增强,而且持续的时间也较长;对于p38信号转导通路,则在TNF刺激30 min后,p38出现磷酸化,而其他组均无.结论:PPI1持续活化型突变体的表达可诱导宫颈癌细胞株的凋亡,并能明显增强HeLa细胞对TNF凋亡刺激的敏感性,其中涉及到JNK、p38信号转导通路的活化增强.

关键词：Ⅰ型磷酸酶、抑制亚基-1、HeLa细胞、细胞凋亡、信号转导、肿瘤坏死因子

所属期刊栏目：26

分类号：R737.33(肿瘤学)

资助基金：广西自然科学基金0542077

在线出版日期：2008-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1177-1182