宫颈癌患者HPV16型E6蛋白的表达纯化及血清抗体检测

摘要：

背景与目的:人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关.本研究构建HPV16 E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16 E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16 E6血清抗体反应与宫颈癌的相关性.方法:将HPV16 E6基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E6表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导表达.表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被ELISA板,检测正常女性、慢性宫颈炎患者和宫颈癌患者血清抗体.同时采用荧光偏振方法分型检测宫颈癌组织HPV DNA.结果:pRSET-16E6表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr 24×103的HPV16 E6组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的22.3%.表达形式为包涵体,重组蛋白纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实.80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者血清抗体阳性率分别为5.0%、6.5%和31.2%,宫颈癌患者HPV16 E6血清抗体阳性率显著高于正常人(P＜0.002)及慢性宫颈炎患者(P＜0.01),而正常人与慢性宫颈炎患者间的差异无显著性.32例宫颈癌患者癌组织中,HPV DNA阳性率90.6%,HPV16 DNA阳性率46.9%.HPV16 DNA阳性组血清HPV16 E6抗体阳性率(46.7%)高于阴性组(17.6%),但两组间的差异无显著性(P＞0.05).结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16 E6融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌患者HPV16 E6血清抗体阳性率明显高于正常人和慢性宫颈炎患者.

关键词：人乳头瘤病毒16型、E6蛋白、基因表达、血清抗体、宫颈肿瘤

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分类号：R373.33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：陕西省科技计划2004K13-G2

在线出版日期：2006-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1374-1379