siRNA沉默多效生长因子表达及其生物学意义

摘要：

背景与目的:多效生长因子(pleiotrophin,Ptn)基因是一种分泌性的生长因子,具有促进肿瘤细胞的增殖与迁移及肿瘤血管的生成等功能.有研究表明,抑制该基因的表达,就能够有效地控制肿瘤细胞的过度增殖,从而达到抑制肿瘤发生与发展的目的.本研究旨在合成一种能够有效抑制该基因表达的小干扰RNA.方法:(1)设计并合成具有基因特异性的一组寡核苷酸片段,并克隆到pSilenceTM 3.1-H1 hygro载体;(2)瞬时转染siRNA表达载体至3T3细胞,以检测不同siRNA对Ptn基因表达的抑制能力;(3)用脂质体Lipofectamine 2000转染和潮霉素筛选等方法建立能稳定表达相应Ptn siRNAs的一组PTEN-/-MEF241细胞株,并对其Ptn的表达水平进行检测;(4)利用细胞生长曲线检测沉默Ptn基因对PTEN-/-MEF241细胞生长的影响;(5)裸鼠成瘤实验观察Ptn基因沉默后,PTEN-/-MEF241细胞致瘤特性的改变.结果:设计并合成了3条针对Ptn基因的siRNAs,并证实其中的1条小干扰RNA,即Ptn siRNA-B能显著地抑制PTEN-/-MEF241细胞中Ptn基因的表达,抑制效率达到95%以上;同时能使PTEN-/-MEF241的生长速度明显减慢;接种裸鼠后成瘤率仅为1/8,而对照组的成瘤率为5/8,发生肿瘤的潜伏期超过90天,而对照组为30天左右,可见裸鼠成瘤率被显著抑制,发生肿瘤的潜伏期大大延长.结论:本研究设计并合成的针对Ptn基因的小干扰RNA,即Ptn siRNA-B能够抑制PTEN-/-MEF241细胞增殖,降低PTEN-/-MEF241细胞的致瘤性,因此可能成为一种新型的肿瘤基因治疗药物.

关键词：小干扰RNA、多效生长因子、肿瘤、基因治疗

所属期刊栏目：25

分类号：R73-36+2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30471946;北京市自然科学基金7052056

在线出版日期：2006-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1210-1215