转染LGRG1基因的喉癌细胞差异蛋白质分析

摘要：

背景与目的:LCRG1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因.先前的研究显示将LCRG1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用.本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选LCRG1抑瘤作用相关的蛋白质.方法:抽提稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白.考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质.结果:获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1 075±43和1027±23,平均匹配率为91%.图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOF MS/MS鉴定了4个.对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质.结论:建立了稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与LCRG1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究LCRG1作用的分子机制提供新的线索.

关键词：喉肿瘤、Hep-2细胞、LCRG1基因、比较蛋白质组、双向凝胶电泳、差异表达蛋白

所属期刊栏目：25

分类号：R739.6;Q51(肿瘤学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2001CB510207;中国科学院资助项目30500558;30240056;30370642;教育部跨世纪优秀人才培养计划2002-48;湖南省科技厅科研项目04XK1001;湖南省科技厅科研项目02SSY2001-1;湖南省卫生厅科研项目Z02-04

在线出版日期：2006-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：22-28