Tet调控的乳腺癌耐受蛋白表达细胞系的建立及功能研究

摘要：

背景与目的:乳腺癌耐受蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)是1998年发现的新的ATP结合盒式(ATP binding cassette,ABC)跨膜转运蛋白超家族成员.本研究拟建立Tet调控的具有功能的BCRP表达细胞系,为研究BCRP介导的药物耐受机制和探寻耐受逆转方法提供理想的实验平台.方法:利用Tet-on基因表达调控系统,先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-BCRP转染人PA317细胞,并用G418和潮霉素分别进行二轮筛选,挑取6个单细胞克隆并扩增培养;不同浓度的强力霉素(doxycycline,Dox)诱导后,用RT-PCR和Western blot检测并选取BCRP表达量与Dox剂量具有较好量-效关系的PA317/Tet-on/TREBCRP细胞克隆;采用MTT方法检测米托蒽醌(mitoxantrone)对不同浓度Dox诱导下的PA317/Tet-on/TRE-BCRP克隆细胞的杀伤作用;采用BCRP特异性抑制剂Ko143的干扰试验来检测PA317/Tet-on/TRE-BCRP细胞对米托蒽醌的药物敏感性;米托蒽醌处理不同BCRP表达量的细胞后,利用流式细胞仪检测细胞内存留米托蒽醌所释放出来的荧光强度.结果:发现5号PA317/Tet-on/TRE-BCRP克隆细胞BCRP表达量与Dox诱导剂量具有较好的量-效关系;其药物耐受性与BCRP表达量呈正相关(r=0.995,P=0.002);Ko143能显著增强PA317/Tet-on/TRE-BCRP细胞对米托蒽醌的药物敏感性(P＜0.05);流式细胞术进一步证实在A317/Tet-on/TRE-BCRP细胞内不同浓度Dox诱导的BCRP不同表达能引起细胞内米托蒽醌存留量的变化.结论:成功地建立了Tet调控的具有功能的乳腺癌耐受蛋白(BCRP)表达细胞系,为进一步研究BCRP提供了理想的实验平台.

关键词：乳腺癌、耐受蛋白、诱导表达、药物耐受性

所属期刊栏目：23

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：湖南省自然科学基金02jjy2052

在线出版日期：2004-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1127-1133