一种用流式细胞术检测基因转移效率的新方法

摘要：

背景与目的:基因转移效率一直以来都是用表达报告基因的细胞(显色或发荧光)占细胞总数的百分比(即转染率)来表示,此百分比是由研究者借助显微镜(或荧光显微镜)计数得出来的.该方法(本文称为人工计数法)存在客观性、准确性不够和工作量大、且不能同时检测基因表达效率等问题.本研究拟寻找一种客观、准确、简便地检测基因转移和表达效率的新方法.方法:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为目的基因、重组腺病毒(AdCMV/GFP)为基因载体,用人工计数法测定其对肝癌细胞株HepG2的转染率;用流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定其对肝癌细胞株HepG2、Bel7402、Hep3B、SMMC7721和鼻咽癌细胞株CNE-2的转染效率和GFP(绿色荧光蛋白)基因的表达效率(以荧光指数表示).结果:以FCM测得AdCMV/GFP对HepG2的转染率与载体量呈对数相关(与人工法相似,但前者略高),荧光指数与载体量呈线性相关(r=0.9984),其它细胞株的结果与HepG2相似.结论:采用FCM法测定基因转移效率克服了主观因素的影响,测定结果客观准确,可以用于测定基因载体对真核细胞的转染效率,或研究转录调控元件的功能.

关键词：腺病毒载体、基因转移效率、流式细胞术、绿色荧光蛋白、人工计数

所属期刊栏目：21

分类号：Q782;Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39825124;广东省医药卫生科研项目B1999072;国家"211"工程建设项目98063

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：267-271