银染mRNA差异显示方法的建立和二次扩增参数优化

摘要：

@@1992年Ling[1]等建立了差异反转录PCR技术(differential display reverse transcription PCR,DDRT-PCR）,为差异表达基因的分离克隆提供了一个全新的思路，该技术由于需mRNA量少，且有简单、迅速、可同时比较多个样品等特点，成为目前分离差异表达基因广为采用的方法。原始DDRT-PCR以放射自显影成像，敏感性高，但也存在应用同位素所带来的诸多不便，使其应用受到限制。我们在选择应用该技术时，注意到近来出现的非放射性DDRT-PCR方法，如银染法、地高辛标记法、荧光法等，其中银染法更为简捷，与同位素显影敏感性相近，在DNA分析中应用广泛，为此，我们采用银染方法呈现PCR扩增产物。在建立该方法时，对DDRT-PCR中各影响因素进行了优化，获得了满意的电泳条带图谱，由于采用银染显色，使差异条带的回收更准确便利。本文还确定了理想的目的DNA片段再扩增参数，为差异基因片段的鉴定奠定了基础。

关键词：mRNA差异显示、银染、基因扩增

所属期刊栏目：20

分类号：R734.3(肿瘤学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：330-331