白藜芦醇对热应激诱导肉鸡脾脏淋巴细胞增殖及凋亡的作用研究

摘要：

本试验旨在研究白藜芦醇对热应激诱导肉鸡脾脏淋巴细胞增殖及凋亡的作用.本试验通过分离和消化白羽肉鸡脾脏组织,成功培养出原代淋巴细胞,并能稳定传代.通过构建正常细胞模型(37℃)和热应激细胞模型(42℃培养3 h),培养鸡脾脏淋巴细胞,并分别添加不同剂量的白藜芦醇(15、30、60 μg/mL).运用CCK8法测定热应激对脾脏淋巴细胞存活率的影响;取脾脏淋巴细胞上清液,用乳酸脱氢酶(LDH)法测量LDH活性;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色法检测脾脏细胞凋亡水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测凋亡蛋白的含量;提取总RNA,用实时荧光定量PCR法测量热休克蛋白70(HSP70)基因相对表达量的变化;提取总蛋白,用Western blot法检测HSP70、肿瘤抑制因子53(p53)、凋亡激活因子-1(APAF-1)、肿瘤抑制因子65(p65)、核因子κB抑制蛋白(IκB)、肿瘤抑制因子38(p38)蛋白表达量.结果表明:热应激处理导致淋巴细胞增殖显著下降(P＜0.05),LDH活性显著增加(P＜0.05).用15、30、60 μg/mL白藜芦醇处理脾脏淋巴细胞并热应激培养时,细胞增殖呈剂量依赖性增加(P＜0.05),LDH活性显著下降(P＜0.05).热应激会造成淋巴细胞凋亡和损伤,添加白藜芦醇后显著降低了细胞凋亡率(P＜0.05).热应激导致淋巴细胞的p53含量和p53蛋白表达量显著增加(P＜0.05),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)含量显著降低(P＜0.05),BBcl-2相关X蛋白(Bax)含量显著增加(P＜0.05).热应激时添加或正常条件下添加白藜芦醇会使Bcl-2含量显著增加(P＜0.05),Bax含量显著降低(P＜0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase 9)含量显著降低(P＜0.05),APAF-1的蛋白表达量显著降低(P＜0.05).热应激时添加白藜芦醇对p53蛋白表达量没有显著影响(P＞0.05).综上所述,白藜芦醇可以剂量依赖性增加细胞增殖、减轻细胞凋亡等,从而减轻热应激导致的脾脏淋巴细胞的损伤.

关键词：白藜芦醇、热应激、脾脏淋巴细胞、增殖、凋亡

所属期刊栏目：35

分类号：S831(家禽)

资助基金：国家自然科学基金31972600

在线出版日期：2023-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：4604-4616