白藜芦醇通过沉默调节蛋白1-解偶联蛋白2信号通路降低小鼠睾丸间质细胞TM3的氧化损伤

摘要：

本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制.首先,用不同浓度(0、150、200、250、300 μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度;然后,用不同浓度(0、2.5、5.0和10.0 μmol/L)的RES分别处理正常细胞24 h,确定RES安全浓度;最后,用安全浓度的RES处理氧化损伤细胞24 h.在整个培养过程中采用iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖情况;待安全浓度的RES处理氧化损伤细胞结束后采用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blotting)法分别检测沉默调节蛋白1(SIRT1)/解偶联蛋白2(UCP2)信号通路中关键因子SIRT1和UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量.结果表明:1)用浓度为150μmol/L及以上的H2O2处理细胞8h后,极显著降低细胞存活率(P＜0.01),因此确定150 μmol/L为建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度.2)用10.0μmol/L及以下浓度的RES处理正常细胞24 h后,细胞存活率均无显著变化(P＞0.05);用2.5、5.0和10.0μmoL/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞存活率均显著提高(P＜0.05),且各浓度RES组间无显著差异(P＞0.05).因此,选用5.0 μmol/L为RES的安全浓度.3)用5.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞中ROS的含量极显著降低(P＜0.01);细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量极显著增加(P＜0.01),而UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量则显著或极显著降低(P＜0.01或P＜0.05).由此可见,适宜浓度的RES可激活SIRT1同时抑制UCP2的表达,UCP2通过负反馈调节方式减少细胞内ROS的生成,从而在一定程度上抑制TM3细胞的氧化损伤.

关键词：白藜芦醇、氧化损伤、沉默调节蛋白1、解偶联蛋白2、小鼠睾丸间质细胞TM3

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分类号：S823;R285.5(家畜)

资助基金：国家自然科学基金项目31772819,31572591;中国博士后科学基金第七批特别资助2014T70770

在线出版日期：2018-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2632-2640