猪硒蛋白P基因克隆、鉴定及组织mRNA相对表达量分析

摘要：

本试验旨在克隆、鉴定猪硒蛋白P基因（ Sepp1），并探明其在猪不同组织中的mRNA相对表达量，为以猪为模型研究硒蛋白P（ SelP）的功能奠定基础。根据表达序列标签（ EST）序列设计引物，利用cDNA末端快速克隆（3′-RACE ）技术从猪肝脏总RNA中扩增出含开放阅读框（ ORF）至polyA片段，然后与EST序列进行拼接；采用荧光定量PCR技术考察Sepp1在猪9个组织中的mRNA相对表达量。结果显示：1）扩增出共1707 bp的片段，测序后与EST拼接获得了2109 bp的猪Sepp1序列，并提交至NCBI GenBank数据库，序列号为EF113596．2；该基因1170 bp的ORF编码区和对应的氨基酸残基与人相应序列分别有83．72％和75．64％序列同源性，其编码390个氨基酸，含有14个硒代半胱氨酸（ Sec）残基，分别位于第59、267、286、309、311、327、339、352、354、361、376、378、385和387位。2） Sepp1 mRNA在猪组织中广泛分布，在肝脏中具有最高分布，依次为甲状腺＞肾脏＞睾丸＞下丘脑＞脾脏＞垂体＞心脏＞肌肉。本试验成功克隆、鉴定了猪Sepp1，检测了其在猪不同组织中表达分布情况，为其进一步以猪为模型探讨其功能奠定了基础。

关键词：猪、Sepp1、克隆、荧光定量PCR

所属期刊栏目：28

分类号：S828(家畜)

资助基金：国家自然科学基金面上项目30871844，31272468；四川隆达畜牧科技有限公司项目2015SCLD001

在线出版日期：2016-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：858-863