猪NLRP3基因Real-time PCR检测方法的建立及应用

摘要：

根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189.通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了 NLRP3的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中NLRP3表达水平.最佳引物浓度为0.15 μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝,熔解曲线有单一峰,批内变异系数CV为0.067％～0.184％,批间变异系数为0.221％～0.594％,重复性好.该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的NLRP3 mRNA表达水平,感染组与健康组相比差异显著(P＜0.01),NLRP3表达水平明显增高,在感染后14 d可达到高峰,平均mR-NA拷贝数达18 000左右,可持续42 d.表明该检测方法稳定性良好,精确度高,特异性强,为进一步研究猪炎症小体NLRP3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持.

关键词：NLRP3基因、实时荧光定量PCR、猪肺炎支原体

所属期刊栏目：44

分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省外专双百计划项目;海南省家畜家禽工程技术研究中心开放课题;海南省农业科学院重点实验室开放课题;中央引导地方科技发展专项

在线出版日期：2023-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：19-23