牛源TAK1基因慢病毒载体构建及其在MDBK细胞中的表达

摘要：

为了探究转化生长因子-β激活蛋白1(TAK1)在牛疱疹病毒1型(BHV-1)感染中的作用,构建牛源TAK1基因慢病毒载体,筛选TAK1基因稳转过表达细胞株.根据GenBank中牛源TAK1基因序列(登录号:NM-001081595.1)设计引物,PCR扩增目的片段后插入载体中,构建pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,将其导入293T细胞进行慢病毒包装及滴度测定.用包装好的慢病毒感染牛肾上皮细胞(MDBK),筛选过表达TAK1基因的稳转细胞株,通过荧光显微镜和免疫印迹试验(Western blot)进一步验证该基因的过表达.重组质粒双酶切与测序结果表明成功建立了 pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒.慢病毒滴度测定结果显示,过表达TAK1基因组病毒滴度为1.0×108 TU/mL,空载体对照组病毒滴度为5.0×108 TU/mL.重组慢病毒以MOI 180转染MD-BK 细胞,荧光显微镜观察到明显的红色荧光,表明慢病毒质粒转染成功.Western blot结果显示,在相应分子量处检测到目的条带,进一步表明TAK1基因被表达.成功构建了 pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-tur-boRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,并筛选出了过表达TAK1基因的MDBK稳转细胞株,为深入研究TAK1在BHV-1感染中机制的研究奠定基础.

关键词：TAK1基因、过表达、慢病毒载体、MDBK细胞

所属期刊栏目：44

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金32272991

在线出版日期：2023-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6-11