TGEV-RBD基因在昆虫杆状病毒中的表达及鉴定

摘要：

旨在获得具有天然结构且有反应原性的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)受体结合域(RBD)蛋白.受体结合域是决定病毒宿主和嗜性的关键因素.根据猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白(S)序列(GenBank:ABC72414.1),设计、优化并合成其受体结合域(RBD)部分,亚克隆至杆状病毒pFastBacTM Dual上,获得重组质粒,命名为pFBD-TGR.将该质粒转化DH10Bac感受态细胞中,筛选较大的白色菌落,获得重组杆状质粒Bacmid-TGR,转染至sf9细胞中进行拯救病毒,转染后5d～7d,收上清,传至第3代,应用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot检测sf9细胞上清,进行目的 蛋白表达鉴定.结果 显示,重组穿梭质粒Bacmid-TGR构建成功,Western blot结果证明,杆状病毒表达了TGEV-RBD蛋白且能与Strep tag抗体和抗猪传染性胃肠炎病毒多克隆抗体发生特异性反应,间接免疫荧光结果证明,成功地表达了TGEV-RBD蛋白,为进一步开展猪传染性胃肠炎病毒抗体研究以及新型疫苗的研发奠定了基础.

关键词：猪传染性胃肠炎病毒;杆状病毒;受体结合域;蛋白表达

所属期刊栏目：42

分类号：S852.659.6;S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目2019RU059

在线出版日期：2021-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：65-70