猪细小病毒 VP2的原核表达与多克隆抗体制备

摘要：

克隆猪细小病毒（PPV）VP2基因全长1740 bp，构建其原核表达载体后进行蛋白的表达与纯化，接种家兔制备多克隆抗体。用 PCR 方法扩增 PPV VP2全长基因，扩增产物克隆至表达载体 pET-32a并转化至 E．coli BL21（DE3）感受态中。分别用不同诱导时间、IPTG 浓度、温度诱导表达 VP2重组蛋白，经SDS-PAGE 电泳切胶回收纯化目的蛋白。对家兔进行3次免疫后，采集血清制备抗体。PCR 扩增得到1740 bp 的 VP2基因片段；构建原核表达载体 pET-32a-VP2，经37℃，IPTG 浓度1．0 mmol／L 诱导表达4 h可得分子质量大小约为82 ku 目的蛋白；间接 ELISA 检测抗体效价可达1∶12800；Western blot 证明所制备的抗体能够有效的应用于 PPV VP2抗原的检测。本研究成功构建了表达 PPV VP2基因的原核载体，获得了 VP2蛋白，制备了兔抗多克隆抗体，为建立检测 PPV VP2蛋白 ELISA 方法奠定了基础。

关键词：猪细小病毒、VP2 蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：37

分类号：S852.655(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31372401

在线出版日期：2016-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：47-52