稳定表达鸡ST3GALⅠ基因BHK-21细胞株的建立

摘要：

筛选稳定表达鸡ST3Gal工基因的BHK-21细胞株,为进一步研究禽流感病毒大规模细胞培养生产疫苗奠定基础.克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达质粒pcDNA3.1-EGFP中构建重组质粒pcDNA3.1-EGFP-ST3GaⅠ,鉴定正确的真核表达载体转染BHK-21细胞后,ST3GalⅠ基因在细胞中稳定表达,经G418抗性和RT-PCR筛选鉴定表达阳性的单克隆细胞株.将H9亚型禽流感病毒和H5N1 Re-5禽流感病毒按不同比例接种BHK-21-ST3GalⅠ细胞和空白BHK-21细胞,同时设普通胰酶和TPCK-胰酶对照组以检测BHK-21-ST3Gal Ⅰ细胞对H9亚型禽流感病毒和H5N1 Re-5禽流感病毒的增殖效果.接毒72 h后收获细胞液,常规方法测定血凝素(HA)滴度.通过在BHK-21细胞中稳定表达ST3GalⅠ基因,提高BHK-21细胞表面SAα-2,3Gal受体丰度连续传6代后仍然能检测到其表达,荧光显微镜下能看到绿色荧光,RT-PCR可检出1029 bp的目的条带.结果显示,BHK-21-ST3GalⅠ细胞在接毒量为2％时HA滴度达到1∶256,显著高于空白BHK-21细胞组,表明其更适于流感病毒的增殖,具备生产流感病毒疫苗的潜力.

关键词：鸡、ST3GALⅠ基因、重组质粒、稳定表达、BHK-21细胞

所属期刊栏目：34

分类号：Q813.11(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家科技支撑计划项目动物疫苗关键生产技术研究与开发2009BADBAB04-3

在线出版日期：2013-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：10-15