10.3321/j.issn:1000-2790.2009.13.001
酵母双杂交系统筛选IRE1相互作用的蛋白质
目的:寻找与需肌醇酶1(IRE1)相互作用的蛋白质,研究该基因的功能及其在肝细胞凋亡中的作用.方法:采用酵母双杂交方法,分别以hIRE1α(人IRE1α)N端段1~465位氨基酸及C端段468~977位氨基酸为诱饵,与人睾丸cDNA文库质粒先后转化AH109酵母菌株,经三重/四重营养缺陷培养基及X-α-GAL半乳糖苷酶试验筛选,将PCR鉴定为阳性的酵母质粒转入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析.最后通过酵母回转杂交实验对获得的相互作用加以验证.结果:成功构建诱饵质粒pGBKT7-IRE1N及pGBKT7-IRE1C,并在酵母中正确表达融合蛋白,自激活检测及毒性检测均为阴性.分别筛选出8个及15个与IRE1相互作用的蛋白质;通过回转实验验证,确定了能与IRE1 C端段相互作用的基因SHISA5,其编码产物为SCOTIN,是P53相关定位于内质网的凋亡诱导蛋白.结论:SCOTIN与IRE1的相互作用提示内质网应激诱导的凋亡与P53通路有关.
需肌醇酶1、SCOTIN基因、应激、凋亡、p53、肝细胞
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R657.3(外科学各论)
国家重点基础研究发展规划973计划2002CB713701
2009-08-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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