一种筛选中和活性抗人TNF单抗细胞模型的建立及其应用

摘要：

目的:建立一种筛选中和活性抗人肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF) mAb细胞模型,并从一组抗人TNF mAb中筛选出具有相对较高中和活性的mAb. 方法:用含100 mL/L FCS的DMEM细胞培养液将L929细胞的浓度调整到1×108/L,按每孔100 μL,加入至96孔细胞培养板中,培养过夜. 弃细胞培养上清后,将200 μL的实验液转入培养板中,继续培养16 h. 活细胞用结晶紫染色,脱色后,于570 nm波长测定A值. 结果:浓度在0.3～0.5 mg/L范围内的放线菌素D(antinomycin D, ActD)对L929细胞的生长抑制作用比较稳定;TNF的浓度高于20 kU/L时, 能够使95%以上的实验细胞发生凋亡; 浓度在12.5～50.0 μg/L范围的mAb对TNF的中和作用具有明显的剂量依赖关系; 在ActD, TNF和mAb的浓度分别为0.35 mg/L, 20 kU/L和25.0 μg/L的条件下,发现D2的中和活性与阳性对照抗体无显著性差异(P>0.05),但高于阴性对照抗体,E6,D12,E11 (P<0.01). 与阴性对照抗体比较,E6, E11也具有一定的中和活性(P<0.05),而D12无中和活性(P>0.05). 结论:本研究建立的mAb抑制TNF诱导L929细胞凋亡的细胞模型可用于筛选中和活性抗TNF mAb;D2的中和活性相对较高,可作为构建治疗性嵌合抗体的制剂.

关键词：肿瘤坏死因子、单克隆抗体、中和活性、细胞模型

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分类号：R392.11

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2001CB510004;国家自然科学基金30371281

在线出版日期：2005-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：780-783