针对增强型绿色荧光蛋白RNA干扰表达载体的构建和鉴定

摘要：

目的: 构建针对增强型(EGFP)的pSUPER siRNA(small interferencing RNA)表达载体,并在哺乳动物细胞COS-7细胞中观察其干扰效果.方法: 设计针对EGFP编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BglⅡ和HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSUPER中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.通过脂质体介导,将重组干扰质粒与pIRESE2-EGFP瞬时共转染COS-7细胞,48 h后荧光显微镜下观察干扰效果.结果: 经酶切鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中已插入了目的基因片段.瞬时共转染后荧光显微镜观察结果显示: 只转染pIRES2-EGFP及共转染pIRES2-EGFP和空载体pSUPER 的COS-7细胞中有大量的EGFP表达.而共转染pIRES2-EGFP和pSUPER-R237、pSUPER-R304、pSUPER-R447的COS-7细胞中发出荧光的细胞数量明显减少,荧光强度也明显降低.结论: 成功构建了针对EGFP的RNA干扰表达载体pSUPER-R237,pSUPER-R304和pSUPER-R447,并与pIRESE2-EGFP瞬时共转染COS-7细胞,有效地抑制了EGFP在哺乳动物细胞中的表达.

关键词：RNA干扰、增强型绿色荧光蛋白、COS-7细胞系

所属期刊栏目：26

分类号：R329.28(人体形态学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2004CB518805;国家高技术研究发展计划863计划2004AA217071;国家自然科学基金30200274

在线出版日期：2005-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：676-678