HSV-tk/GCV自杀基因系统对骨肉瘤细胞体外杀伤效应

摘要：

目的: 观察HSV-tk/GCV系统对骨肉瘤细胞SAOS-2的体外杀伤作用. 方法: 构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN,在lipofectamine2000介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人骨肉瘤细胞SAOS-2,G418筛选出抗性克隆命名为SAOS/tk,以RT-PCR及Southern blot检测tk基因的整合及表达. 观察tk基因修饰细胞生长状况及MTT法观察前药对tk基因修饰骨肉瘤细胞的杀伤效应. 结果: RT-PCR及Southern blot分析证明tk基因在人骨肉瘤细胞系SAOS-2中有整合及表达;SAOS/tk与未转基因的原肿瘤细胞相比,两者生长速度及形态结构无明显差别;在前药敏感性试验中,GCV对SAOS/tk细胞的杀伤作用十分明显,半数致死量约为1 mg/L,而亲本细胞SAOS-2和空白质粒转染SAOS/0细胞,半数致死量大于100 mg/L. tk基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合后经GCV治疗,SAOS/tk占混合细胞总数的20%时即可杀伤约50%的混合培养细胞. 结论: 人骨肉瘤细胞系SAOS-2对HSV-tk/GCV系统高度敏感,并且有明显的旁观者效应,可望成为骨肉瘤基因治疗的新途径.

关键词：骨肉瘤、HSV-tk基因、基因治疗

所属期刊栏目：25

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：204-207