丙型肝炎病毒ns5b基因的克隆、表达及鉴定

摘要：

目的: 构建HCV ns5b基因的重组原核表达质粒,并获得NS5B蛋白的高效表达,为制备抗NS5B抗体及以其为靶位的抗HCV感染研究创造条件. 方法: 利用PCR技术扩增HCV ns5b基因,XhoⅠ和KpnⅠ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体pRSETA上,转化大肠杆菌JM109菌株,获得阳性重组质粒pRSETA-ns5b, 阳性质粒转化BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot电泳进行鉴定,并以薄层扫描分析对其定量. 结果: 成功构建了HCV NS5B蛋白表达载体pRSETA-ns5b,经诱导明显表达出6His-NS5B融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白25%,Western-Blot结果显示表达蛋白保持活性. 结论: HCV NS5B蛋白在体外得到了有效表达.

关键词：C型肝炎样病毒属、非结构区5B蛋白、重组融合蛋白质类、基因表达

所属期刊栏目：24

分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：陕西省自然科学基金2001SM51

在线出版日期：2003-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1265-1267