巢式竞争DNA模板的制备方法

摘要：

@@0　引言　我们建立了巢式竞争PCR定量方法进行血清HBV DNA定量扩增［1］. 在该实验中我们采用了简便的长引物引导扩增方法制备了特殊的巢式竞争DNA模板.
1　材料和方法
1. 1　材料　我们对HBV DNA C区1865-2458区段进行巢式扩增定量，而巢式扩增片段长度为559 bp. 按文献HBV DNA序列 ［2］，用oligo引物设计软件和www.ncbi.nlm.nih.gov DNA同源性数据库分析设计巢式引物. 两外侧引物分别为：b1: （上游1865-1883）5′caagcctccaagctgtgcc 3′，b2 （下游2458-2440）5′atactaacattgagattcc 3′；两内侧引物分别为：b3: （上游1877-1893）5′ctgtgccttgggtggcttt 3′，b4：（下游2435-2417）5′gagatcttctgcgacgcgg 3′. 我们欲制备的竞争模板为459 bp. 为了使巢式竞争模板和待测模板一样含有上述4个引物结合序列，我们设计了一个长为57个碱基的竞争模板DNA的制备引物，该引物从5′至3′分别含有巢式扩增的下游引物b2、b4和与HBV DNA C区2286-2269区序列结合区序列（斜体部分）［3］，竞争模板制备引物b5：5′ggatactaacattgagattcccgagatcttctgcgacgcggagtgcgaatccacact 3′.

关键词：DNA、模板、方法、聚合酶链反应

所属期刊栏目：22

分类号：R51(传染病)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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