鼠抗人TNF-α单域抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

摘要：

目的:RT-PCR法获得鼠抗人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)单克隆抗体E6轻、重链可变区基因序列,分别构建融合表达载体pGE6VH和pGE6VL,利用大肠杆菌系统表达VH和VL单域抗体蛋白. 方法:将RT-PCR法获得的E6VH和E6VL基因分别克隆入融合表达载体pGEX4T-1中,使它们受控于Ptac启动子, 转化大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,100 g/L SDS-PAGE检测表达产物. 结果:SDS-PAGE显示E6VH表达产物分子质量约为38 ku,E6VL表达产物分子质量约为37 ku,与预期结果相符. 光密度扫描结果表明,谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-VH融合蛋白占菌体总蛋白的45%,GST-VL 融合蛋白占菌体总蛋白的36%,Western-blot证实在相应分子质量处,有GST-VH和GST-VL融合蛋白的显色条带. 结论:在大肠杆菌DH5α中成功地表达了hTNF-α的单域抗体基因.

关键词：肿瘤坏死因子、融合表达、单域抗体、谷胱甘肽巯基转移酶

所属期刊栏目：20

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39670695

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：563-565