从血液和唾液中自动化提取人体DNA的探索与应用

摘要：

目的 从样本获取方式、储存条件和DNA提取方法等方面探索快速、有效、低成本、无创伤、适合于大规模流行病学研究的基因组DNA来源样本.方法 对带有分离胶的血细胞、EDTA抗凝全血、分离血清后的凝固血细胞、新鲜唾液、-20℃保存1个月的唾液、2种唾液保护液作用的唾液样本和棉拭子获得的口腔黏膜上皮细胞样本进行DNA提取和检测,验证不同样本获得DNA的稳定性.随机抽取1人的2份质量控制合格的DNA样品,采用高通量测序技术对亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性位点进行分型检测.结果 带有分离胶的血细胞样本中,分离胶对血细胞DNA的提取效果影响明显,DNA样品合格率为37.7％(1130/3000).EDTA抗凝全血样本DNA提取效果良好,DNA浓度为(180.20±20.30)mg/L,D260/D280为1.90±0.10.分离血清后的凝固血细胞样本中DNA降解严重,提取的DNA浓度为28.91～34.53 mg/L.新鲜唾液和-20℃保存1个月的唾液样本经提取后得到的DNA浓度均合格,且差异无统计学意义(P>0.05).2种唾液保护液作用下的唾液样本提取得到的DNA浓度均合格,且差异无统计学意义(P>0.05).口腔黏膜上皮细胞样本提取的DNA浓度为(48.41±9.81)mg/L,低于唾液样本来源的DNA浓度.高通量测序结果显示,按照质量控制标准筛选的合格DNA样品可以实现体外目的基因片段的扩增和MTHFR C677T基因多态性位点的分型检测.结论 血液和唾液样本均是人体基因组DNA提取的良好来源,唾液样本成本低、采集无创伤且质量控制合格,是一种更有效的DNA来源样本.

关键词：唾液、血液、DNA提取、单核苷酸多态性

所属期刊栏目：42

分类号：R342.3(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：达能营养中心膳食营养研究;宣教基金

在线出版日期：2021-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：214-219