利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体

摘要：

目的 构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体,最终获得胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入小鼠,为胰岛β细胞功能研究提供良好的基因敲除动物模型.方法 以低拷贝质粒pBR322-2s为骨架构建取获载体(retrieving vector),应用λ噬菌体Red重组酶介导的缺口修复(gap-repair)方法,通过细菌内的同源重组克隆长度约为12 kb的小鼠胰岛素2(Ins2)基因组DNA,同时构建1个带有内部核糖体进入位点(IRES)序列、Cre重组酶序列和正负向筛选标记基因的微型打靶载体(mini-targeting vector),最后通过同源重组获得Ins2-Cre打靶载体.结果 以Ins2基因的第3外显子为靶点,成功构建了受内源性Ins2基因启动子严格调控的表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体.结论 成功构建了在胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体,为获得胰岛β细胞中基因特异性敲除小鼠模型提供了关键材料.

关键词：胰岛分泌细胞、Cre重组酶、基因打靶、打靶载体、同源重组、内部核糖体进入位点

所属期刊栏目：35

分类号：R349.6(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金31025013,81170718.Supported by National Natural Science Foundation of China 31025013,81170718

在线出版日期：2014-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：185-190