人HBV、HBx定向敲入p53位点大鼠胚胎干细胞株的建立

摘要：

目的 建立人HBV、HBx定向敲入p53位点的大鼠胚胎干细胞株,为建立相关动物模型奠定基础.方法 通过PCR方法扩增出人p53基因上下游同源臂、HBV全基因组序列、HBV的X蛋白编码基因(HBx),将其插入本实验室自主构建的基因打靶通用载体pKO中,分别构建pKO-gHBV及pKO-X打靶载体.载体经SalⅠ酶切线性化后,电转入状态良好的大鼠胚胎干细胞株中,经3轮药物筛选,获得单细胞克隆.通过PCR技术筛选获得阳性细胞克隆,并进行支原体污染鉴定和核型分析.结果 成功构建pKO-gHBV及pKO-X打靶载体；电转大鼠胚胎干细胞株,经3轮药物筛选,分别挑取若干细胞克隆,其中2个pKO-X细胞克隆和1个pKO-gHBV细胞克隆经PCR鉴定、支原体检测和核型分析确定结果正确.结论 成功建立了人HBV、HBx定向敲入p53位点的大鼠胚胎干细胞株,为后续建立动物模型奠定了基础.

关键词：乙型肝炎病毒、HBx基因、p53基因、胚胎干细胞

所属期刊栏目：33

分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家杰出青年科学基金30925037;国家重点基础研究发展计划“973”计划2010CB529900-G

在线出版日期：2012-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：945-949