异源性筛选标记对白假丝酵母菌耐受各种应激的影响

摘要：

目的 考察以His1-Leu2-Arg4基因敲除策略敲除白假丝酵母菌基因后,异源性筛选标记C.dubliniensis HIS1(C.d.HIS1)、C.maltosa LEU2(C.m.LEU2)和C.dubliniensis ARG4(C.d.ARG4)对菌株耐受各种应激的影响.方法 以SN152为亲本菌,融合PCR法构建重组片段,醋酸锂法转染白假丝酵母菌SN152,分别构建上述3个标记的回复菌.采用套式PCR法鉴定回复菌的构建,spot assay实验考察菌株对各种应激的敏感性.结果 PCR验证7种菌株构建成功,spot assay结果显示各回复菌对pH应激、氧化应激、各种临床抗菌药应激、金属离子应激、细胞壁损伤相关药物应激、渗透应激、DNA损伤化合物应激的敏感性与亲本菌SN152一致.而给予0.02％ SDS时各菌株的敏感性不一致,缺乏C.d.HIS1标记的菌株在0.02％SDS的应激条件下不能生长.结论 C.d.HIS1、C.m.LEU2和C.d.ARG4 3个异源性筛选标记不影响白假丝酵母菌对大部分应激的敏感性,不同标记基因敲除菌间可以相互比较,且可以统一用SN152作为对照菌株.在考察SDS应激时,所用筛选标记不同,对结果有影响,不能用SN152代替作为统一对照,若要相互比较,要保证C.d.HIS1标记必须一致.

关键词：白假丝酵母菌、基因敲除、异源性筛选标记、应激

所属期刊栏目：33

分类号：R379.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金31000079;上海市基础研究重点项目10JC1417500

在线出版日期：2012-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：929-934