亲环素A的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备

摘要：

目的 构建人亲环紊A(CypA)基因的原核表达载体,诱导表达、纯化蛋白,制备抗体.为进一步研究其生物学作用奠定基础.方法 以人肺癌组织总RNA为模板,RT-PCR扩增CypA基因片段,克隆到pMD18-T载体中.扩增产物与原核表达载体pET30a(+)连接,构建表达质粒pET30a-CypA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍树脂亲和层析柱High-Affinity Ni-IDA Resin纯化表达产物,SDS-PAGE检测纯化蛋白.用获得的蛋白免疫大白兔,制备抗CypA蛋白多抗,采用蛋白印迹法检测抗体特异性.结果 成功构建了CypA的原核表达载体,经大肠杆菌诱导表达、镍亲和层析柱纯化,得到纯度达80.2%的融合蛋白,免疫大白兔后得到多抗血清.蛋白印迹结果显示此多克隆抗体能与CypA蛋白特异性结合.结论 成功获得CypA纯化蛋自及CypA多克隆抗体,为进一步研究CypA在肺癌中的作用机制奠定了基础.

关键词：亲环索A、原核表达、分离纯化、亲和层析、多克隆抗体

所属期刊栏目：31

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2010-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：445-447