高纯度可溶性嵌合蛋白VEGI+的表达纯化

摘要：

目的:制备纯化的新型血管生长抑制剂可溶性嵌合蛋白VEGI+,为进一步研究其活性奠定基础.方法:应用PCR方法制备血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI)与寡肽CTTHWGFTLC相嵌合的融合基因VEGI+,将PCR产物克隆至pGEM-T载体中,经酶切及测序鉴定后,与原核表达载体pET30a(+)重组,构建重组表达载体pET30a-VEGI+,转化大肠杆菌BL21并诱导表达,纯化并鉴定表达产物.结果:成功扩增融合基因VEGI+,构建的重组质粒pET30a-VEGI+酶切鉴定结果与预期一致,诱导后表达产物以包涵体为主.SDS-PAGE电泳及Western印迹结果表明,复性纯化后的嵌合蛋白VEGI+相对分子质量约为23 000,纯度约为90%.结论:成功构建了重组表达载体,并在大肠杆菌诱导表达,亲和层析纯化后获得纯度较高的可溶性嵌合蛋白VEGI+.

关键词：血管内皮生长抑制因子、寡肽类、基因融合

所属期刊栏目：28

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：上海市科学技术委员会专项基金05nm05010

在线出版日期：2008-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1324-1328