小鼠microRNA-21?慢病毒抑制载体的构建及鉴定

摘要：

目的构建microRNA-21(miR-21)慢病毒抑制载体,为研究miR-21在小鼠体内的功能及作用机制打下基础.方法利用miR-21前体并将其克隆入LV3 pGLV-H1-GFP质粒中,经酶切及测序鉴定,利用脂质体将鉴定的阳性重组LV3 pGLV-H1-GFP-miR-21抑制载体、PG-P1-VSVG和pCMV-dR 3个质粒转染到HEK-293 T 细胞,将所得病毒感染293 T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒感染乳鼠心肌细胞和尾静脉注射小鼠,检测miR-21在小鼠体内的表达.结果酶切及测序结果证明成功构建了LV3 pGLV-H1-GFP-miR-21重组质粒,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为2.4×109 TU/ml,重组病毒成功感染心肌细胞,同时在Balb/c小鼠心脏有表达.结论成功构建miR-21慢病毒抑制载体,获得高效表达miR-21的慢病毒颗粒,为miR-21的进一步研究奠定了基础.

关键词：microRNA、miR-21慢病毒抑制载体、绿色荧光蛋白

在线出版日期：2013-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：35-37