红三叶 ISSR-PCR 反应体系的建立与优化

摘要：

采用正交试验设计,对影响红三叶 ISSR-PCR 反应较大的4个因素(Taq DNA 聚合酶、Mg2+、dNTP 及引物)在4个水平上进行筛选,建立并优化了适合红三叶 ISSR 分析的最佳反应体系。在25μL 反应体系中各反应物的最适含量为40 ng 模板 DNA,10×PCR-buffer 2.5μL,2.5 mmol/L Mg2+,2.5 U Taq DNA 聚合酶,引物1μmol/L,0.2 mmol/L dNTP。反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s,引物退火30 s,72℃延伸1 min,循环35次；72℃延伸7 min,4℃保存。优化体系的建立为采用 ISSR 分子标记技术进行红三叶种质资源遗传多样性分析提供了技术参考。

关键词：红三叶、ISSR-PCR、正交优化

分类号：S541;Q75(饲料作物、牧草)

资助基金：农业部牧草种质资源保护项目2013014;甘肃高校基本科研业务费项目2012009

在线出版日期：2015-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：21-26