LRG1通过CCR1促进类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞激活的机制研究

摘要：

目的 探讨富亮氨酸重复糖蛋白1(LRG1)对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭及人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成的影响及机制.方法 将成纤维样滑膜细胞系MH7A细胞分为6组:对照组(未做任何处理)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组(20 ng/mL TNF-α处理细胞)、阴性对照干扰小RNA(NC siRNA)组(细胞转染NC siRNA后以TNF-α处理)、LRG1 siRNA组(细胞转染LRG1 siRNA后以TNF-α 处理)、LRG1 siRNA+Vector 组(细胞转染 LRG1 siRNA 和 pcDNA3.1 后以 TNF-α 处理)和 LRG1 siRNA+趋化因子受体1(CCR1)组(细胞转染LRG1 siRNA和pcDNA3.1-CCR1后以TNF-α处理).采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;MH7A培养基处理HUVECs,采用血管形成实验检测血管生成能力;实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western blot检测LRG1、CCR1 mRNA及蛋白表达水平.免疫共沉淀实验(Co-IP)检测LRG1与CCR1的相互作用.结果 与对照组比较,各浓度(5、10、20、40ng/mL)TNF-α组LRG1mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),且20 ng/mL为最佳浓度.与NC siRNA组相比,LRG1 siRNA组细胞增殖能力[(137±15)％vs.(228±24)％,P＜0.05]、迁移能力明显降低,侵袭细胞数明显减少[(56.0±6.7)个vs.(102.0±7.9)个,P＜0.05].沉默LRG1后HUVECs的血管形成能力明显降低.Co-IP结果显示,LRG1可与CCR1相互作用.沉默LRG1可下调CCR1表达水平(P＜0.05),而过表达CCR1可逆转LRG1沉默对MH7A细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论 LRG1通过CCR1促进MH7A细胞增殖、迁移、侵袭和HUVECs血管生成,为RA的治疗奠定了理论基础.

关键词：类风湿性关节炎、富亮氨酸重复糖蛋白1、趋化因子受体1、增殖、侵袭、血管生成

所属期刊栏目：52

分类号：R593.22(全身性疾病)

资助基金：国家自然科学基金;陕西省自然科学基金

在线出版日期：2023-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2570-2576,2585