小鼠组织总RNA制备方法及样本储存时间对qRT-PCR影响的探讨

摘要：

目的 探讨适合现代医学实验室的高效组织总RNA提取方法,以及组织样本储存时间对后续实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测有效性的影响.方法 分别采用全自动样本处理器+磁珠法全自动核酸提取(方法1)、全自动样本处理器+离心柱法(方法2)、手工匀浆器+磁珠法全自动核酸提取(方法3)和手工匀浆器+离心柱法(方法4)4种方法制备小鼠新鲜心、肝、肾组织总RNA,比较各方法制备的总RNA质量.评价方法1和方法4制备的新鲜、-80 ℃储存1年和2年的小鼠肝组织总RNA质量及其对qRT-PCR检测结果的影响.结果 方法1制备的小鼠新鲜组织总RNA浓度、完整性均优于其他3种方法.方法1制备的1年和2年肝组织总RNA完整性均明显优于方法4.3个不同储存时间肝组织样本的Ct值范围分别为18～19、21～22和27～28,2年肝组织样本总RNA降解明显.结论 方法1是最佳的组织总RNA制备方法,尤其针对保存2年内的稀有生物样本.用于qRT-PCR检测的生物样本于-80 ℃储存时间最好不超过1年.

关键词：RNA提取、实时荧光定量聚合酶链反应、样本储存时间、有效性、影响

所属期刊栏目：52

分类号：R-331(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金;贵州中医药大学第二附属医院青苗科研启动基金项目

在线出版日期：2023-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1614-1619