大鼠shRNA-Slfn5重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中的转染效率

摘要：

目的 构建大鼠shRNA-Slfn5重组腺病毒载体并观察在内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率.方法 根据Rat Slfn5基因的mRNA序列设计合成siRNA片段5个,分别克隆到pDKD-CMV-U6-shRNA上转入大肠杆菌感受态细胞,PCR筛选转化子,阳性克隆进行测序;利用Admax系统选取目的穿梭质粒shRNA-Slfn5(5)包装和扩增重组腺病毒shRNA-Slfn5及病毒滴度测定;利用Slfn5过表达腺病毒质粒中目的基因携带Flag标签,通过Western blot法检测Slfn5过表达腺病毒质粒与靶点质粒共转染293T细胞中Flag表达,观察靶点质粒对Slfn5表达的影响;最后用病毒感染EPCs并用绿色荧光蛋白量检测转染效率.结果 经测序验证5组目的质粒构建成功;重组腺病毒质粒shRNA-Slfn5(1)、shRNA-Slfn5(4)、shRNA-Slfn5(5)可明显抑制Flag蛋白的表达;shRNA-Slfn5病毒滴度为3.95×1010 PFU/mL;EPCs的转染效率为(85.64±2.58)％.结论 构建了shRNA-Slfn5重组腺病毒载体,其在EPCs转染效率高.

关键词：Schlafen5、内皮祖细胞、shRNA

所属期刊栏目：50

分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金项目;贵州省第十二批优秀青年科技人才项目;贵州省科技计划项目;贵州省留学人员科技活动择优资助项目;贵州省科技平台及人才团队计划项目

在线出版日期：2021-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1277-1283