兔p38MAPK基因沉默腺病毒载体构建及体外干扰效率的鉴定

摘要：

目的 构建并筛选p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)基因沉默腺病毒载体,为进一步研究及应用p38MAPK基因沉默进行瘢痕增生基因治疗奠定基础.方法 依据兔p38MAPK基因的cDNA序列,设计并合成3对干扰序列,并对腺病毒进行包装.分别将以上3对双链DNA oligo退火后连入pDC316-ZsGreen-shRNA载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染HEK293A细胞,包装产生病毒颗粒.各组病毒栽体载染兔皮肤成纤维细胞后,运用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测p38MAPK表达水平.结果 PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pDC316-ZsGreen-ShRNA载体;real-time PCR检测到各组慢病毒感染兔皮肤成纤维细胞后均可以明显抑制p38MAPK mRNA的表达(P＜0.05).以AD-shRNA-P38MAPK-1组抑制效果最明显.结论 成功构建并筛选出针对p38MAPK的最有效RNAi腺病毒表达载体;构建的腺病毒载体可以抑制兔皮肤成纤维细胞p38MAPK的表达.

关键词：p38丝裂原活化蛋白激酶、基因沉默、腺病毒载体、瘢痕增生、成纤维细胞

所属期刊栏目：48

分类号：R782.2(口腔科学)

资助基金：山东省自然科学基金资助项目ZR2015HM022

在线出版日期：2019-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1467-1471