表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞模型的建立

摘要：

目的 研制一种能够表达hCD4和hCCR5基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)模型,以应用于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)研究.方法 构建PLA.ExBi.P/puro-CMV-CD4-IRES-CCR慢病毒载体,按最佳感染复数转染MSCs,荧光定量PCR检测hCD4和hCCR5的mRNA的表达,免疫印迹法检测MSCs中hCD4和hCCR5蛋白的表达,免疫荧光法检测hCD4和hCCR5荧光的表达;将建立的MSCs细胞进行HIV-1感染后,PCR检测HIV RNA的表达.结果 MSCs经转染慢病毒载体后,hCD4和CCR5 mRNA凝胶电泳可见193 bp和75 bp的阳性条带,mRNA的qRT-PCR检测可见其表达升高(P＜0.01);Western blot检测可见55.0×103 (hCD4)和40.6×103 (hCCR5)的阳性条带;免疫荧光成像可见存在CD4和CCR5的荧光表达,而空载慢病毒载体呈阴性.转染后MSCs细胞感染HIV-1后在培养细胞与上清液中HIV-1 RNA均显著升高(P＜0.05).结论 成功建立了高效表达hCD4/CCR5蛋白的骨髓间充质干细胞模型,具备对HIV-1易感的特性,可应用于HIV的发病机制、抗病毒、疫苗开发等研究.

关键词：骨髓间充质干细胞、HIV-1、细胞模型、hCD4/CCR5、基因表达

所属期刊栏目：46

分类号：R-331;R373.9(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81660755,81573861;深圳市科技计划项目JCYJ20170307160524377

在线出版日期：2017-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：4465-4468,4472