M istic融合蛋白促进ω-3脂肪酸去饱和酶 Fat-1在大肠埃希菌中高效表达

摘要：

目的：构建真核膜蛋白ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat‐1基因的重组原核表达质粒pET32a‐Fat‐1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a‐Mistic‐Fat‐1；将两种重组质粒转化大肠埃希菌株BL21（DE3），IPTG诱导表达Fat‐1蛋白和M110‐Fat‐1蛋白，通过十二烷基‐聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS‐PAGE）灰度分析其表达量，蛋白免疫印迹法（Western blot）进一步鉴定蛋白表达。结果经酶切鉴定和测序证实成功构建了pET32a‐Fat‐1和pET32a‐Mistic‐Fat‐1原核表达载体；SDS‐PAGE和Western blot证实ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1在原核表达系统中没有明显诱导表达，而M 110‐Fat‐1融合蛋白在大肠埃希菌中获得了高效表达，占全细胞蛋白总量的15％。结论ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1基因与Mistic基因融合表达，实现了在原核宿主中高效表达真核膜整合蛋白ω‐3脂肪酸去饱和酶Fat‐1。

关键词：M istic、ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因、膜蛋白、高效表达

所属期刊栏目：45

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81300721；扬州市科技计划项目YZ2014204。

在线出版日期：2016-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2190-2193