弓形虫CDPK5基因多克隆抗血清的制备及功能鉴定

摘要：

目的：筛选弓形虫（Tg）CDPK5基因序列的免疫多肽，将合成多肽免疫新西兰白兔制备多抗血清，并对其功能进行鉴定。方法利用生物信息学的方法分析确定Tg CDPK5序列免疫多肽，再用合成的多肽免疫新西兰白兔制备多抗。收集多抗血清，酶联免疫吸附测定（ELISA）测定多抗滴度，蛋白免疫印迹法（Western blot）鉴定免疫活性，免疫荧光实验分析Tg CDPK5的亚细胞定位。结果通过生物信息学分析，选择Tg CDPK5序列N端一段长17 bp的多肽序列作为免疫多肽；用合成的多肽免疫兔子，成功获得多抗血清。ELISA测定多抗血清效价为1∶640000；Western blot证明该多抗血清能特异性识别 Tg CDPK5（75．4×103）条带；免疫荧光实验结果表明，该多抗能特异性识别弓形虫内源Tg CDPK5蛋白。结论研究根据 Tg CDPK5序列信息的分析，获得Tg CDPK5序列免疫多肽，并制备兔源多克隆抗体。

关键词：弓形虫、CDPK5基因、多抗血清、免疫荧光

所属期刊栏目：45

分类号：R392.7

资助基金：广东省医学科学技术研究基金项目2015120124650789。

在线出版日期：2016-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2182-2185