NDY1shRNA真核表达质粒构建及其在卵巢癌A2780细胞中的稳定表达

摘要：

目的：构建NDY1 shRNA真核表达载体，并获得稳定表达shNDY1质粒的卵巢癌A2780细胞。方法根据Gen‐Bank数据库提供的NDY1基因核苷酸序列，设计并合成靶向干扰NDY1基因的小发夹RNA（shRNA）序列，插入表达载体获得重组质粒pGPU6／GFP／Neo‐shNDY1。重组质粒测序鉴定正确后，脂质体介导转染A2780细胞，经G418筛选及有限稀释法获得稳定转染细胞，采用实时定量聚合酶链反应法（RT‐qPCR）和蛋白免疫印迹法分别检测A2780稳定转染细胞NDY1 mRNA及蛋白表达。结果重组质粒测序正确，转染shNDY1后，A2780细胞mRNA及蛋白表达水平分别下降（72．89±4．83）％及（55．85±4．84）％，与对照组相比差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论成功构建 pGPU6／GFP／Neo‐shNDY1真核表达质粒，并获得shNDY1稳定转染的卵巢癌A2780细胞，为细胞水平研究NDY1与卵巢癌的关系奠定实验基础。

关键词：卵巢肿瘤、NDY1、质粒构建、A2780细胞

所属期刊栏目：45

分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81360389；广西自然科学基金资助项目2012GXNSFAA053086；广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题资助项目Z2013026；2013年广西研究生教育创新计划资助项目YCSZ2014101。

在线出版日期：2016-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1012-1015