HPLC法测定apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出的实验研究

摘要：

目的：建立用高效液相色谱（HPLC）法测定载脂蛋白A‐1（apoA‐1）介导的泡沫细胞内胆固醇流出率的实验方法。方法人单核细胞THP‐1用160 nmol／L佛波酯（PMA）诱导24 h分化为贴壁巨噬细胞（PMA组），再用50μg／mL乙酰化低密度脂蛋白（ac‐LDL）处理48 h ，诱导巨噬细胞变成泡沫细胞（ac‐LDL组）；加入含apoA‐1的1640培养基培养24 h（apoA‐1组）。油红O染色和HPLC法测定细胞内胆固醇水平，鉴定巨噬细胞源性泡沫细胞模型。采用 HPLC分析和液体闪烁计数法测定apoA‐1介导的泡沫细胞内胆固醇流出率。结果 T HP‐1巨噬细胞源性泡沫细胞经油红O染色后，细胞内可明显观察到大量红色脂滴存在。胆固醇水平测定显示，ac‐LDL组内游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯的水平明显高于 PMA组（P＜0．01）。ac‐LDL处理细胞48 h后，ac‐LDL 组内总胆固醇水平为80．25μg／mg 细胞蛋白，胆固醇酯水平为47．65μg／mg 细胞蛋白，占总胆固醇的59．38％，与PMA组相比，差异有统计学意义（P＜0．01）。 HPLC分析和液体闪烁计数法结果表明，apoA‐1介导泡沫细胞内apoA‐1组胆固醇流出率分别为5．63％和7．08％（P＜0．01）。结论本研究成功建立了酶促反应结合 HPLC测定泡沫细胞内胆固醇流出的方法，为后续研究细胞脂质代谢提供了实验基础。

关键词：色谱法、高效液相、泡沫细胞、载脂蛋白A-1、胆甾烯酮、胆固醇流出

分类号：Q54(脂类)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81170267；广东省自然科学基金资助项目S2011010002984；东莞市高等院校科研机构科技计划项目2012108102037。

在线出版日期：2015-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：4116-4119,4122